血液瓊脂培養(yǎng)基的制備

一、實驗目的和要求

(1)掌握血液瓊脂培養(yǎng)基(血瓊脂培養(yǎng)基)的制備方法，明確血液瓊脂培養(yǎng)基的用途。

(2)鞏固掌握一般培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基的配制方法和原理。

二、基本原理

血液瓊脂培養(yǎng)基可用于分離營養(yǎng)要求高的微生物。一些病原性真菌或放線菌等難養(yǎng)微生物，對營養(yǎng)要求高甚至十分苛刻，而動物血是微生物生長繁殖的優(yōu)良營養(yǎng)物。研究證明，在45～50℃時加入血液可以保存其中某些不耐熱的生長因子，促進微生物生長。血液瓊脂培養(yǎng)基也可用于溶血實驗。

三、實驗材料與設備

(1)培養(yǎng)基：牛肉膏朊胨培養(yǎng)基，見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備。

(2)儀器或其他用具：裝有5～10粒玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶、無菌注射器、無菌平皿等，其他儀器或用具與天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備相同。

(3)動物：健康的兔或羊。

四、操作步驟

(1)牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備部分。也可用豆粉瓊脂(pH=7．4～7．6)等營養(yǎng)豐富的基礎培養(yǎng)基配制血液瓊脂培養(yǎng)基。

(2)無菌脫纖維兔血(或羊血)的制備：用配備18號針頭的無菌注射器以無菌操作抽取全血(即未經處理的靜脈抽血)(無菌采血操作)，并立即注入裝有無菌玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶中，然后搖動三角燒瓶1．0min左右，形成的纖維朊塊會沉淀在玻璃珠上，把含血細胞和血清的上清液傾人無菌容器即得到脫纖維兔血(或羊血)，置冰箱4℃存儲備用。

注意：整個過程必須嚴格無茵操作。制備脫纖維血液時，應搖動足夠時間以防凝固。也可以直接購買脫纖維兔血(或羊血)。

(3)血液瓊脂培養(yǎng)基的制備：將牛肉膏朊胨瓊脂培養(yǎng)基溶化，待冷卻至45～50℃時，以無菌操作方式，按10％(體積分數)的量加入無菌脫纖維兔血(或#血)于培養(yǎng)基中，立即搖蕩，以便血液和培養(yǎng)基充分混勻。根據具體情況，還可以考慮是否加入10g／L的葡萄糖。

45～50℃加入血液是為了保存其中某些不耐熱的營養(yǎng)物質和保證血細胞的完整，以便于觀察細菌的溶血作用；同時，在這種溫度下瓊脂不會凝固。

(4)迅速以無菌操作倒入無菌平皿中，即成血液瓊脂平板，注意不要產生氣泡。

(5)置37℃培養(yǎng)箱24h，如無菌生長即可使用。

五、實驗報告

(1)消毒、滅菌和除菌有何異同?請列表比較。

(2)高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、紫外線滅菌和微孔濾膜除菌有何異同?列表比較各自的特點和適用范圍。

(3)培養(yǎng)基制備的一般步驟和注意事項是什么?

(4)各種培養(yǎng)基成分的對于微生物生民的主要功能是什么?

(5)各種培養(yǎng)基的適用范圍是什么?列表比較牛肉膏朊胨培養(yǎng)基、高氏I號培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基的成分、特點及應用范圍。

(6)為何培養(yǎng)基制作一般選用瓊脂作為固定劑而不是其他物質?瓊脂是*的固定劑嗎?有非瓊脂固定培養(yǎng)基嗎?

(7)培養(yǎng)基配制過程中，pH如何變化?究竟如何控制和獲得適宜的微生物培養(yǎng)pH?pH的調節(jié)會影響培養(yǎng)基的物理化學性質嗎?

(8)請對照有關國家要求，比如WS 233—2002和GB 19489—2008等，如果開展血液瓊脂培養(yǎng)，注意實驗室基礎條件是否具備?

(9)盡管目前已經有很多培養(yǎng)基的配方，但科學界普遍認為，于實驗條件和認知水平所限，人類目前已知的微生物僅占所有微生物的1％，99％左右的微生物尚不為人類所知，請問原因是什么?你能否更新設計一種或多種培養(yǎng)基，來獲取和認識更多的微生物?